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gibco胎牛血清貨號:10099-141原裝進口現貨

更新時間:2019-07-17

簡要描述:

gibco胎牛血清貨號:10099-141原裝進口現貨

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Gibco胎牛血清使用方法

   在細胞培養過程中,經常加入5%-20%的Gibco胎牛血清,較常使用的Gibco胎牛血清濃度是10%。高濃度的血清可能改變細胞的基因表達譜,影響後續實驗的結果,免费可以看污的网站在實驗中使用10%的Gibco澳洲胎牛血清培養293T細胞,效果非常好。但是有些細胞也會使用5%的Gibco胎牛血清或者20%的Gibco胎牛血清,要根據具體細胞選擇合適的Gibco胎牛血清濃度。

Gibco胎牛血清保存方法

1、需要長期保存的Gibco牛血清,例如Gibco南美胎牛血清,必須儲存於-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會被破壞,而影響血清質量。如果一次無法用完一瓶,可將40~45ml分裝於無菌50ml離心管中。由於血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發生汙染或玻璃瓶凍裂。

2、一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌。如發現Gibco牛血清有懸浮物,例如Gibco北美胎牛血清中發現有懸浮物,則可將血清加入培養液內一起過濾,切勿直接過濾血清。

3、瓶裝Gibco胎牛血清南美解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然後移入室溫,待全部溶解後再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過程中須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沈澱的發生。.切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現沉澱。

4、熱滅活是指56℃, 30分鍾加熱已完全解凍的血清.加熱過程中須規則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體成分滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉澱物顯著增多,而且還會影響血清的質量.補體參與反應有:細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細胞和巨噬細胞發生化學趨化和活化。

5、血清中的沉澱物和絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍後血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質量.可用離心3000rpm,5分鍾去除,也可不用處理。 顯微鏡下"小黑點":經過熱處理過的血清,沉澱物的形成會顯著增多。有些沉澱物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認為血清受汙染。一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質量,則應立即停止使用,更換另一批號的血清。
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Gibco胎牛血清使用中遇到的常見問題總結

一、血清滅活問題。

 

1、問:加到培養基中的血清必須滅活嗎?

 

答:不是必須的,看做什麽實驗了,我在使用Gibco南美血清10270106的時候,都不滅活。

 

2、問:Gibco胎牛血清新西蘭(Gibco新西蘭血清10091148)滅活是56℃ 30分鍾嗎?

 

答:如果用於培養大多數的腫瘤細胞,血清一般是不需要滅活的,例如經常使用Gibco新西蘭胎牛血清,是不用熱滅活的,這樣可以有效保存血清中的生長因子。但是如果用於培養一些表麵具有補體受體的細胞,如內皮細胞,血清是需要滅活,一般是56℃,30min。

 

3、問:我要做滋養細胞培養,Gibco北美胎牛血清要滅活嗎?

 

答:一般的細胞培養中使用到的Gibco胎牛血清,例如Gibco ES胎牛血清是不用滅活的。如果一定需要滅活,可以直接購買Gibco胎牛血清澳洲熱版本,進口Gibco澳洲胎牛血清熱滅活的一般都已滅活。滅活的Gibco血清價格一般比未滅活的Gibco血清價格要高很多。

 

4、問:我用病毒上清轉染細胞,培養用的血清需要滅活嗎?因為血清中可能有些補體和抗體,是不是會影響轉染?我想未滅活的血清中含些抗體補體可能會和病毒相結合,影響轉染,正確嗎?細胞是單核細胞白血病細胞,病毒是病毒包裝細胞PT67收集的病毒上清。為什麽要用無血清培養基加病毒孵育幾小時,目的是什麽?

 

答:血清一定要滅活,可以先用無血清培養基加病毒孵育幾小時以後再加血清。避免雜蛋白對病毒和宿主結合過程的幹擾,一般是2-6小時,根據細胞的狀態決定。血清不一定需要滅活,滅活的目的是將血清中的補體滅活!這要根據實際情況而定,如果沒有把握那就滅活吧,也不麻煩56度半個小時。

 

5、問:(1)我買的是Gibco胎牛血清北美,要滅活嗎?有些說法是需要,有些說直接解凍後就可以加入到培養基中;我配製胰蛋白酶液,用的是D-PBS,有關係嗎?

 

答:關於血清的熱滅活,是很多人感興趣也存在一定爭議的話題。大多數實驗室將血清的熱滅活還是作為常規來執行,因為有兩個作用,*是滅活補體,第二是滅活血清中可能存在的支原體。但是實驗者並沒有考慮熱處理對血清中的生長因子、氨基酸等成分帶來的負麵影響。

 

我在實驗室處理Gibco胎牛血清新西蘭的時候,有一次水浴箱在滅活過程中出現故障,溫度升高到80℃,血清變成了凝膠狀,我重新處理了另外一份Gibco胎牛血清南美,將兩份血清對比,發現高溫直接影響到血清所含的抗體蛋白。在56℃下滅活半小時以上,肯定也會對裏麵的蛋白起到破壞作用。下次有機會我做個延長滅活時間的實驗試試,看看到底有多大的影響。熱滅活之後,血清放在四度冰箱久了,就會有沉澱產生,這常常會被認為是微生物汙染或者是黑膠蟲汙染。為了驗證到底有沒有汙染,常常又會把血清放置37℃溫育,但是血清中的蛋白會進一步析出,最後還是要做鏡檢,無菌培養試驗,和革蘭氏染色試驗,非常麻煩。

 

我看過一份資料,裏麵提到70%的實驗者認為滅活是理所當然的。常規滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,而時間則從15分鍾到60分鍾不等。其中較常用的手法是56℃熱處理30分鍾。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高,許多早先認為是熱滅活的原因已經不再成立,隻有少數對血清進行熱滅活的研究者在實驗中證實了這一步驟的有效性和必要性。有人比較過11個不同細胞株,發現其中熱滅活對6 個細胞株(HBAE,MDBK,Vero,成纖維細胞,MRC-5)的生長帶來負麵影響,三個細胞株(FOX-NY,MDCK和CHO-K1)不受熱滅活的影響,而隻有兩個細胞株(Balb/3T3,Sp2/0Ag14 hybrid),在熱滅活之後,細胞生長有輕微的改善。所以,在正常的操作下,熱滅活通常對細胞的生長沒有明顯的促進作用。

 

你可以摸索一下,Gibco北美血清16000044從-20℃冰箱拿出來之後在常溫解凍,然後混勻分裝成兩份,一份滅活,一份不滅活,比較這兩種Gibco北美血清對細胞是否有影響。然後再確定是滅活還是不滅活。這個過程最多也就一個星期。同時你還要考慮血清滅活與否對你後續的實驗有沒有影響。

 

問:(2)分裝後的Gibco澳洲血清10099141血清從-20℃取出放4℃讓其液化,卻見Gibco澳洲血清10099141血清比較混濁,有沉澱產生,這屬正常嗎?

 

答:正常。

 

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