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MCF7/DDP人乳腺癌順鉑耐藥株|MCF7細胞培養步驟
發布時間:2020-11-09   點擊次數:224次

【背景資料】 見細胞說明書

MCF7/DDP人乳腺癌順鉑耐藥株|MCF7細胞培養步驟
【產品來源】 細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數國內外著名大學建係
"公司提供貼壁、半貼壁、懸浮、半懸浮、貼壁與懸浮混合等細胞特性,一般細胞培養PBS量是10%,如果出現細胞狀態不良情況,可以提高PBS量到15%,SHEE人永生化食管上皮細胞待細胞穩定後,調回PBS量10%,對於初次實驗者,一般細胞培養,都需要加入雙抗防止細胞汙染,細胞匯合度達到90%,免费可以看污的网站開始寄送,這樣可以保持細胞收到時,良好的細胞活力。


一、售前
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三、細胞生長條件:
培養條件   
GIBCO(培養基90% +10%FBS)
溫度                   
                    37℃
空氣條件  
5% CO2,,95% AIR
傳代方法
1:2傳代,2~3天換液
凍存條件
90%FBS+10%DMSO
 
四、細胞收到後處理
    細胞在培養瓶中培養至良好狀態後灌滿完全培養液並封好瓶口是細胞運輸的好辦法。收到細胞回到自己的實驗室後,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個瓶消毒後放到超淨台內,嚴格無菌操作。鏡下觀察:未超過80%匯合度時,可將瓶裝的完全培養液移入廢液缸中,原瓶(T25瓶)保留6-8ml完全培養液,懸浮細胞需離心處理,放入37℃、5%CO2孵箱培養;超過80%匯合度時,根據情況傳代或者凍存,具體操作見細胞培養步驟。
 MCF7/DDP人乳腺癌順鉑耐藥株|MCF7細胞培養步驟
培養步驟:
1)複蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鍾,棄去上清液,補加4-6mL完全培養基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入6cm皿中),培養過夜。第二天換液並檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
 
1、對於貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)於培養瓶中,置於37℃培養箱中消化1-2min,然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓並脫落,迅速拿回操作台,輕敲幾下培養瓶後加5ml以上含10%血清的完全培養基終止消化。
3.輕輕吹打細胞,完全脫落後吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鍾,棄去上清液,補加1-2mL培養液後吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養液,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。
PS:若客戶收到2ml小管細胞,收到細胞後,用75%酒精噴灑整個管子消毒後放到超淨台或安全櫃內,嚴格無菌操作;將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿,加入5ml左右完全培養基混勻,放入培養箱過夜培養後查看細胞密度:若密度未超過80%,換液繼續培養,視情況傳代或者凍存。若密度超過80%,可直接進行傳代(方法同上)。
2、對於懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鍾,棄去上清液,補加1-2mL培養液後吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基後,將剩餘細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
 
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基後加入少量胰酶,細胞變圓脫落後,進行離心收集,1000RPM條件下離心8-10分鍾,去除上清,按凍存數量加入血清及DMSO,凍存比例為90%FBS+10%DMSO。
 
PS:若客戶收到2ml小管細胞,收到細胞後,用75%酒精噴灑整個管子消毒後放到超淨台或安全櫃內,嚴格無菌操作;將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿,加入5ml左右完全培養基混勻,放入培養箱過夜培養後查看細胞密度:若密度未超過80%,換液繼續培養,視情況傳代或者凍存。若密度超過80%,可直接進行傳代(方法同上)。
 
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